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| ▣ 검사법의 종류 |
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(1) 엘라이자(Elisa:Enzyme-Linked Immunosorbent Assays) 검사방법
엘라이자(Elisa) 방법이란 항원항체반응을 이용하여 변형 프리온 단백질을 검출해내는 방법이다. 짧은 시간(4~5시간)에 판정이 가능하며 한번에 많은 샘플을 검사할 수 있다는 것이 특징이다. 반면, 감도가 매우 높기 때문에 변형 프리온 단백질 뿐 아니라 정상적인 프리온 단백질도 검출해 버릴 수 있다는 단점이 있다. 이 방법은 BSE 속성 검사로 이용되고 있으며 확정 판정에 이르려면 추가로 확진 검사가 필요하다.
2) 웨스턴블롯(Western Blot) 검사방법
웨스턴블롯(Western Blot) 방법은 냉동 또는 냉장 조직시료로부터 단백질 분해효소인 프로티나아제(proteinase)를 처리하여 정상 프리온 단백질을 제거한 후 변형 프리온 단백질을 검출하는 방법이다. 위의 엘라이자 방법에 비해 정확도가 높은 반면 시간이 걸리며(12시간 정도), 보다 고도의 조작이 필요하기 때문에 통상적으로 엘라이자 방법에 의해 속성으로 검사된 이후의 확진 검사 방법으로 사용된다.
(3) 면역조직화학(IHC: Immunohistochemistry) 검사방법
면역조직화학(IHC) 검사방법은 항체를 이용해 뇌조직 내에 변형 프리온 단백질을 염색함으로써 그 존재를 확인하는 방법이다. 이 방법은 변형 프리온 단백질의 검출이 용이하며 변형 프리온 단백질의 형태학적인 분포를 알 수 있다.
이 중 국제수역사무국(OIE)에 의해 모두 인증된 BSE 확진 검사법인 면역조직화학법(IHC)과 웨스턴블롯(Western Blot)에 대한 좀더 자세한 비교는 다음과 같다. |
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면역조직화학검사법
Immunohistochemistry
(IHC) |
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* 미농무부의 BSE 감시프로그램에 사용되는 1차 확진 방법이다.
* 국제수역사무국(OIE) 인증방법이다.
* 두 가지 방법으로 BSE 양성 반응인지를 결정한다. : 육안 (뇌조직이 스폰지화되었는지를 관찰)검사 또는 염색방법 (비정상 프리온의 존재를 확인)
* 뇌의 조직 중 obex주)를 검사하여, BSE의 특징인 병변(구멍이나 스폰지 형)이 있는지를 확인하며, 비정상 단백질을 검출하기 위해 항체를 이용한 염색방법 사용한다.
* 4-7일 소요
* 샘플을 냉동시켜도 해당 샘플이 obex라면 IHC를 수행하는데 전혀 영향이 없다. | |
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웨스턴블롯
(Western Blot) |
* 여러가지 방법이 존재하며 이중 SAF Immunoblot이 국제수역사무국(OIE)의 인증 방법이다.
* 미농무부의 프로토콜 하에 사용되고 있으며 IHC 방법으로 부적합한 샘플, 즉 자체적으로 분해되었거나 뇌간 구조가 현미경상에 확실치 않을 경우에 사용한다.
* obex의 많은 양을 샘플로 사용한다; 초원심분리기를 사용하여 뇌조직의 비정상 프리온 단백질을 농축하여 이 샘플을 단백질 분해효소에 노출시킨 후 정상 단백질을 용해하여 비정상 프리온 단백질만 남긴다. 이렇게 준비한 샘플을 젤을 통과시켜 분자량 별로 비정상 프리온 단백질을 분리한다. 이렇게 분리된 단백질을 막으로 옮겨, 이 단백질을 항체를 이용하여 염색하는데 이 항체는 BSE를 포함하는 프리온 질병과 관련한 특정 결합패턴을 보여 검출할 수 있다. 이 방법을 사용하면 3개의 뚜렷한 밴드를 관찰할 수 있다.
* 샘플을 냉동시켜도 western blot을 실시하는데 전혀 영향이 없다. | |
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두가지 검사방법의
유사점 및 차이점 |
* IHC나 Western blot 모두 국제적으로 인증된 BSE 확진 방법이다.
* 뇌조직에 비정상 프리온 단백질이 있는지를 검사하는데 있어 서로 다른 방법을 사용한다.
* IHC 검사법은 추가적으로 BSE의 특징인 뇌조직상의 병변이 있는지를 검사할 수 있다.
* 이 두 가지 검사 방법 공히 전형적인 BSE를 검사할 수 있는데 있어 동등하게 효과적이다. | |
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| 주)obex : 뇌의 연수의 빗장 자료 : 미국동식물검역소 |
| ▣ 미국의 BSE 확진 검사 방법 |
BSE는 거의 대부분 나이든 보행 불능소나 신경이상 증세를 보이는 소, 상해를 입은 소, 비정상적으로 쇠약한 소, 또는 알 수 없는 이유로 죽은 소 등에서 주로 발견된다. 따라서 미국은 고위험우군에 속하는 소를 대상으로 1차 속성 검사를 실시하고 여기서 가양성 반응을 보일 경우 국제수역사무국(OIE)에 의해 인증된 국제적으로 통용되고 있는 BSE 확진 방법 중의 하나인 면역조직화학법(IHC)을 이용한 정밀 검사를 실시하여 최종 판정을 하였다.
그러나 2005년 6월 미국의 두번째 BSE로 확진 된 소에 면역조직화학법(IHC) 외에 웨스턴블롯(Wesgtern Blot)이 추가로 사용된 것을 계기로, 향후에 다시 BSE 속성 검사에서 가양성 반응을 보일 경우에 미농무부는 면역조직화학법(IHC)와 웨스턴블롯(Western Blot)을 모두 사용하여 BSE인지를 확진할 것이며 양쪽 방법 모두에서 양성을 보이면 그 샘플은 최종적으로 BSE로 판정하는 것으로 규정을 새롭게 바꾸었다. |
| ▣ 결 론 |
위에 열거한 면역조직화학(IHC)검사 방법이나 웨스턴블롯(Western Blot) 방법 모두 국제수역사무국(OIE)에 의해 BSE 확진 방법으로 인증을 받았으며 동등하게 효과적인 방법이다. 따라서 두 가직 방법 중 어떤 것을 사용하느냐 하는 것은 각국의 선택에 달려있다. 그러나 이 두가지 방법에서 간혹 엇갈린 결과가 나오는 경우가 있어 최근에는 SBE 확진 검사 방법의 신뢰도를 높이기 위해 두가지 모두를 동시에 사용하는 것이 세계적인 추세이다.
미국은 미국에서 BSE가 발견되기 훨씬 전부터 BSE 감시 프로그램을 실시해왔다. 지난 2004년 6월1일부로 미농무부는 기존의 검사 프로그램에서 더욱 강화된 BSE 감시 프로그램을 시행하고 있으며 2005년 8월 말 현재까지 총 40만두가 넘는 BSE 고위험 소에 대한 검사를 실시하였다. 또한 프로그램 초기 단계부터 계획되었던 나이든 건강한 소 2만두에 대해서도 BSE 검사를 확대 실시할 예정이다. 따라서 미국에서 발견된 BSE는 모두 이러한 BSE 감시 프로그램을 실시하는 중에 나온 것들로 이는 미국이 취한 여러가지 BSE 방화벽들이 의도한 바대로 정확히 작동하고 있다는 것을 의미한다. 미농무부는 이러한 방화벽의 사용으로 BSE로 판정된 소들은 식품공급망으로 유입되지 않고 소비자들은 이러한 이유로 쇠고기를 소비하는 데 확신을 가져도 된다는 것을 보장할 수 있다. 미농무부는 소비자들이 지속적으로 미국의 소의 건강을 확신할 수 있도록 하기 위해 BSE 확진 방법을 한가지 더 실시함으로써, BSE 확진 검사로 면역조직화학법(IHC)과 웨스턴블롯(Western Blot)을 동시에 사용하는 세계적인 추세에 발 맞추어 미국의 BSE 검사 방법의 신뢰도를 높여 미국의 BSE 방화벽을 보다 강화시켜나갈 것이다. |
